Seurat中SCTransform后获取残差方差的技术解析
2025-07-02 23:19:21作者:谭伦延
在单细胞RNA测序数据分析中,Seurat的SCTransform方法是一种常用的数据归一化和方差稳定化方法。本文将深入探讨SCTransform处理后如何获取残差方差,以及相关技术细节。
SCTransform处理流程概述
SCTransform方法主要包含两个回归步骤:
-
负二项式回归:首先对原始计数数据进行负二项式回归,这一步计算得到的残差均值和残差方差存储在SCTModel.list$counts@feature.attributes中。
-
线性回归:如果设置了vars.to.regress参数,会对第一步的结果进行额外的线性回归,回归后的残差均值存储在scale.data槽中。
残差方差的获取方法
值得注意的是,scale.data槽仅包含经过第二次回归后的残差均值,而不包含残差方差。要获取考虑额外协变量后的残差方差,目前没有直接的方法,但可以通过以下方式自行计算:
-
确保在运行SCTransform时设置return.only.var.genes = FALSE,以保留所有基因而非仅高变基因。
-
对scale.data中的表达数据与协变量进行线性回归分析,从回归结果中提取残差方差。
高变基因的选择机制
SCTransform中高变基因(HVG)的选择仅基于第一步负二项式回归得到的残差方差(resVar),而不考虑后续线性回归中引入的额外协变量。这意味着:
- 高变基因的确定不受vars.to.regress中设置协变量的影响
- 这种设计是出于数据居中(centering)的考虑
- 如果需要考虑协变量的影响,需要按照上述方法自行计算残差方差并筛选基因
技术建议
对于需要精确考虑协变量影响的研究,建议:
- 先运行完整的SCTransform流程
- 手动进行协变量回归分析
- 基于回归后的残差方差重新定义高变基因
- 在后续分析中使用自定义的高变基因列表
这种方法虽然增加了分析步骤,但能更准确地反映数据特性,特别是在存在强协变量影响的情况下。
理解SCTransform的内部处理机制对于正确解释分析结果至关重要,特别是在需要严格控制协变量影响的实验设计中。
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