Seurat项目中Multiome数据分析的基因组注释问题解析
2025-07-02 07:13:32作者:廉彬冶Miranda
基因组注释命名风格不一致问题
在Seurat项目中处理Multiome数据(ATACseq+RNAseq)时,经常会遇到基因组注释的命名风格不一致问题。这个问题源于不同基因组参考版本对染色体命名的差异:
- NCBI风格:使用"1, 2, 3,..., X, Y"格式
- UCSC风格:使用"chr1, chr2, chr3,..., chrX, chrY"格式
问题现象分析
当使用10x Genomics平台生成的Multiome数据时,即使原始数据是用GRCh38参考基因组处理的,在Seurat分析流程中仍可能出现以下问题:
- 使用NCBI风格的GRCh38参考时,ClosestFeature函数会报错,提示"None of the supplied regions were found in the supplied annotation"
- 警告信息显示查询区域中的seqlevels(如chr1, chr2等)在提供的基因注释中不存在
- 切换为UCSC风格的hg38参考后,分析流程可以正常运行
解决方案
正确的基因组注释设置
# 获取Ensembl数据库的基因组注释
annotations <- GetGRangesFromEnsDb(ensdb = EnsDb.Hsapiens.v86)
# 设置染色体命名风格为UCSC
seqlevelsStyle(annotations) <- 'UCSC'
# 设置基因组版本为hg38
genome(annotations) <- "hg38"
# 创建染色质分析对象
chrom_assay1 <- CreateChromatinAssay(
counts = atac_counts,
sep = c(":", "-"),
genome = 'hg38',
fragments = frag.file,
min.cells = 10,
annotation = annotations
)
原因解析
10x Genomics的Cell Ranger ARC处理流程虽然使用GRCh38参考基因组,但其输出的peak区域和片段文件实际上采用了UCSC风格的染色体命名(chr1, chr2等)。因此:
- 在Seurat分析中必须保持染色体命名风格的一致性
- 使用UCSC风格的hg38参考可以确保peak区域与注释文件匹配
- 这种命名风格不一致不会影响下游分析结果的准确性
最佳实践建议
- 检查染色体命名风格:使用
extractSeqlevels()
函数检查数据的染色体命名风格 - 保持一致性:确保所有输入数据(peak文件、片段文件和注释文件)使用相同的命名风格
- 优先使用UCSC风格:对于10x Genomics数据,建议默认使用UCSC风格的hg38参考
- 转换命名风格:必要时可以使用
seqlevelsStyle()
函数在不同命名风格间转换
通过遵循这些实践,可以避免Multiome数据分析中的基因组注释问题,确保分析流程的顺利运行。
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